авторефераты диссертаций БЕСПЛАТНАЯ РОССИЙСКАЯ БИБЛИОТЕКА - WWW.DISLIB.RU

АВТОРЕФЕРАТЫ, ДИССЕРТАЦИИ, МОНОГРАФИИ, НАУЧНЫЕ СТАТЬИ, КНИГИ

 
<< ГЛАВНАЯ
АГРОИНЖЕНЕРИЯ
АСТРОНОМИЯ
БЕЗОПАСНОСТЬ
БИОЛОГИЯ
ЗЕМЛЯ
ИНФОРМАТИКА
ИСКУССТВОВЕДЕНИЕ
ИСТОРИЯ
КУЛЬТУРОЛОГИЯ
МАШИНОСТРОЕНИЕ
МЕДИЦИНА
МЕТАЛЛУРГИЯ
МЕХАНИКА
ПЕДАГОГИКА
ПОЛИТИКА
ПРИБОРОСТРОЕНИЕ
ПРОДОВОЛЬСТВИЕ
ПСИХОЛОГИЯ
РАДИОТЕХНИКА
СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО
СОЦИОЛОГИЯ
СТРОИТЕЛЬСТВО
ТЕХНИЧЕСКИЕ НАУКИ
ТРАНСПОРТ
ФАРМАЦЕВТИКА
ФИЗИКА
ФИЗИОЛОГИЯ
ФИЛОЛОГИЯ
ФИЛОСОФИЯ
ХИМИЯ
ЭКОНОМИКА
ЭЛЕКТРОТЕХНИКА
ЭНЕРГЕТИКА
ЮРИСПРУДЕНЦИЯ
ЯЗЫКОЗНАНИЕ
РАЗНОЕ
КОНТАКТЫ

Pages:     | 1 |   ...   | 4 | 5 ||

Клинико-экспериментальное обоснование применения интерлейкина-1 для профилактики и терапии поражений при радиационных авариях

-- [ Страница 6 ] --

Изменения метаболизма нейтрофилов, которые наблюдались после облучения проб крови в дозе 4 Гр на фоне парентерального введения ИЛ-1, сопровождались и модификацией эффекторных свойств данных клеток. Так, радиационное воздействие in vitro до введения ИЛ-1 вызывало статистически значимое (р<0,05) снижение показателей спонтанной и индуцированной ФМА адгезии, уменьшалась миграционная способность нейтрофилов к ИЛ-8.

Через 3 ч после начала внутривенной инфузии ИЛ-1 и последующего облучения проб крови in vitro в дозе 4 Гр достоверные (р<0,05) отличия, по отношению к исходным значениям, определялись в параметрах, характеризующих процессы адгезии и миграции, показателях спонтанного и индуцированного зимозаном НСТ-теста, а также характеристиках хемилюминесценции нейтрофилов. Следует отметить, что при облучении без введения препарата наблюдалось статистически значимое (р<0,05) уменьшение показателей НСТ-теста, а спонтанная и индуцированная ФМА или зимозаном хемилюминесценция нейтрофилов были, напротив, более высокими (р<0,05).

Анализ относительных показателей клеточного иммунитета показал, что при облучении в дозе 4 Гр проб периферической крови людей через 3 ч после начала внутривенной инфузии ИЛ-1 процентное содержание CD3+ лимфоцитов по сравнению с данными облучения до введения препарата было в 1,4 раза ниже. Снижение числа CD3+ клеток в этот период происходило в основном за счет статистически значимого (р<0,05) уменьшения относительного содержания CD4+ лимфоцитов, что отражалось и на значении индекса иммунорегуляции: 1,12 ± 0,11 против 1,50 ± 0,08 в контроле.

Облучение проб крови людей через 6 ч после начала введения препарата также сопровождалось уменьшением относительного содержания CD3+ и CD4+ лимфоцитов (р<0,05). Кроме того, в этот срок исследования наблюдалось и статистически значимое (р<0,05) снижение CD20+ лимфоцитов по сравнению с данными необлученных проб, а значение CD4+/CD8+ составляло 1,23 ± 0,07.

Применение ИЛ-1 за 24 ч до облучения проб крови людей в дозе 4 Гр полностью отменяло пострадиационное снижение изученных субпопуляций лимфоцитов. Следует отметить, что относительное содержание CD95+ клеток в этот период (24,6 ± 10,8%) было существенно ниже, чем в случае после облучения без введения препарата (37,6 ± 14,6%) и даже по сравнению с данными необлученных проб крови (30,3 ± 9,45%). Необходимо также подчеркнуть, что, несмотря на применение ИЛ-1, уровень 0-лимфоцитов после радиационного воздействия был существенно повышен, а относительное содержание HLA+ клеток значимо не отличалось от значений групп сравнения.

После облучения проб крови людей в дозе 4 Гр без предварительного введения ИЛ-1 статистически значимо (р<0,05) по сравнению с исходным уровнем возрастало число мононуклеаров с внутриклеточной формой ИЛ-1 и ФНО- и с поверхностной формой ФНО- (рис. 11).

 Количество мононуклеаров,-9

Рис. 11. Количество мононуклеаров, синтезирующих и секретирующих цитокины, в периферической крови людей до и через 24 ч после введения интерлейкина-1 и последующего облучения проб периферической крови в дозе 4 Гр in vitro, % (n = 6)

# – различия достоверны (p < 0,05) по сравнению с данными до облучения;

## – различия достоверны (p < 0,05) по сравнению с данными после облучения без введения ИЛ-1

При профилактическом применении ИЛ-1 за 24 ч до радиационного воздействия in vitro содержание клеток, синтезирующих ИЛ-1 и ФНО-, также увеличивалось в 5,2 раза и 7,1 раза, соответственно, по отношению к данным необлученных проб. Статистически значимо (р<0,05) возрастал и уровень мононуклеаров, продуцирующих ФНО- во внеклеточное пространство (в 2,2 раза). Следует, однако, отметить, что отношение содержания клеток с внутриклеточной формой ИЛ-1 к уровню мононуклеаров с поверхностной формой ФНО- под влиянием ИЛ-1 изменялось более чем в два раза. В частности, после облучения без использования препарата этот индекс составлял 0,39, а после радиационного воздействия in vitro на фоне профилактического (за 24 ч) парентерального введения ИЛ-1 его значение возрастало до 0,98.

Радиационное воздействие in vitro в дозе 4 Гр сопровождалось тенденцией к снижению спонтанной и индуцированной митогенами пролиферативной активности лимфоцитов. При использовании ИЛ-1 до облучения проб периферической крови показатели спонтанной реакции бласттрансформации практически не отличались от исходных значений. В то же время, пролиферативная активность Т-лимфоцитов в ответ на ФГА в дозе 2,5 мкг/мл при облучении на фоне введенного ИЛ-1 уменьшалась: через 3 ч после начала внутривенной инфузии препарата – на 49%, через 6 ч – на 84% (p<0,05), через 24 ч – на 69% (p<0,05). В ответ на ФГА в дозе 15 мкг/мл показатели реакции бласттрансформации Т-лимфоцитов после введения ИЛ-1 и последующего облучения проб крови также снижались: через 3 ч – на 52%, через 6 ч – на 78% (p<0,05), через 24 ч – на 62% (p<0,05). В среднем на 40% уменьшалась и пролиферативная активность В-лимфоцитов, оцененная в реакции бласттрансформации в ответ на митоген лаконоса в дозе 5 мкг/мг.

Таким образом, результаты, представленные в настоящем разделе, свидетельствуют о том, что ИЛ-1 обладает выраженной радиозащитной активностью по отношению к лейкоцитам людей, а максимальный радиопротекторный эффект препарата, оцениваемый по количественным и функционально-метаболическим показателям лейкоцитов периферической крови, наблюдается через 24 ч после парентерального введения ИЛ-1.

В основе радиозащитного и лечебного действия ИЛ-1 лежит его способность предотвращать постлучевую депрессию кроветворения, уменьшать выраженность процесса апоптоза, а также стимулировать иммунитет и неспецифическую резистентность организма. Основные пути реализации противолучевой активности ИЛ-1, подтвержденные результатами наших исследований, представлены на схеме.

Увеличение числа функционирующих лейкоцитов в периферической крови с сохранением их функциональной активности Пути реализации противолучевой активности ИЛ-1 Предотвращение апоптоза зрелых лимфоцитов циркулирующего пула
Передислокация гемопоэтических клеток-предшественников из костного мозга в периферические органы (селезенку) Стимуляция пролиферации гемопоэтических клеток-предшественников в костном мозге и, как следствие, увеличение их числа Регуляция синтеза и продукции других цитокинов, участвующих в обеспечении радиорезистентности организма, в частности, ИЛ-1, ФНО-

Резюмируя результаты проведенных экспериментально-клинических исследований и данные литературы, необходимо отметить, что рекомбинантные цитокины вообще, и интерлейкин-1 в частности, занимают уникальное место в системе средств профилактики и лечения радиационных поражений. В отличие от радиопротекторов ИЛ-1 обладает одновременно как профилактическим, так и лечебным действием, проявляет свой радиозащитный эффект не только при остром радиационном воздействии, но и при пролонгированном, фракционированном, сочетанном внутреннем и внешнем облучении, и, судя по данным литературы, при местных и комбинированных радиационных поражениях [Заргарова Н.

И. и др., 2000; Ремизов Д.В., 2000]. Этот цитокин оказывает непосредственное воздействие на основное звено патогенеза радиационных поражений – систему гемопоэза, защищая кроветворные клетки от лучевой гибели и ускоряя их восстановление после облучения [Аксенова Н.В., 2004; Neta R., 1997]. Положительным моментом является и то, что радиозащитное действие ИЛ-1 проявляется как в условиях однократного применения, так и при курсовом введении, и сохраняется в течение достаточно длительного времени. Важно также, что фармакопейный препарат рекомбинантного ИЛ-1 «Беталейкин» относится к немногим средствам профилактики и лечения радиационных поражений, выпускаемым в Российской Федерации [Назаров В.Б., Гребенюк А.Н., 2008]. Все это позволяет рекомендовать внедрение ИЛ-1 в существующую схему профилактики и лечения радиационных поражений, так как только комплексное применение традиционных и вновь создаваемых средств и методов позволит обеспечить эффективную защиту организма при воздействии поражающих факторов радиационной природы.

ВЫВОДЫ

1. Рекомбинантный интерлейкин-1 при введении за 24 ч до облучения и через 1 ч после радиационного воздействия обладает выраженным радиозащитным эффектом, что позволяет рассматривать его в качестве нового лечебно-профилактического средства обеспечения безопасности при чрезвычайных ситуациях радиационного характера.

2. В условиях острого радиационного воздействия интерлейкин-1 является эффективным медицинским средством противорадиационной защиты, позволяющим увеличивать выживаемость облученных животных: ФИД препарата при его применении в качестве радиопротектора составляет 1,18-1,20, а при использовании в качестве средства ранней патогенетической терапии радиационных поражений – 1,16-1,18. При пролонгированном радиационном воздействии, сочетанном внешнем и внутреннем облучении профилактическое и лечебное использование интерлейкина-1 позволяет увеличить выживаемость облученных животных в среднем на 40-50%.

3. Интерлейкин-1 увеличивает миграционную и пролиферативную активность ранних предшественников гемопоэза. Применение данного препарата за 24 ч до облучения или через 1 ч после радиационного воздействия способствует сохранению жизнеспособности значительного числа стволовых кроветворных клеток и ускоряет восстановление гипоплазированного после радиационного воздействия костного мозга.

4. В условиях острого, пролонгированного, фракционированного и сочетанного внешнего и внутреннего облучения профилактическое и лечебное применение интерлейкина-1 позволяет уменьшить выраженность ранней постлучевой лейкопении и ускоряет восстановление количества клеток белой крови в поздние сроки после облучения.

5. Стимулирующий эффект интерлейкина-1 в отношении показателей функционально-метаболического статуса нейтрофилов, измененных в результате различных вариантов радиационного воздействия, проявляется увеличением внутриклеточного содержания катионных белков, повышением активности миелопероксидазы и щелочной фосфатазы.

6. Введение интерлейкина-1 в дозе 5 нг/кг хорошо переносится людьми и, несмотря на кратковременное повышение температуры тела до субфебрильных цифр, не оказывает отрицательного влияния на самочувствие и объективный статус людей, а также на биохимические показатели крови. Гемо- и иммуностимулирующее действие препарата у людей проявляется развитием умеренно выраженного нейтрофильного лейкоцитоза, повышением функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов, увеличением количества клеток, синтезирующих и продуцирующих провоспалительные цитокины.

7. Введение людям рекомбинантного интерлейкина-1 за 24 часа до облучения их проб их периферической крови in vitro отменяет радиационно-индуцированное снижение абсолютного числа CD4+, CD8+ и CD20+ лимфоцитов, уменьшает пострадиационное ингибирование щелочной фосфатазы в нейтрофилах, нормализует адгезивные свойства гранулоцитов и их миграционную способность, снижает выраженность пострадиационных нарушений в цитокиновой сети.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомбинантный интерлейкин-1 рекомендуется для применения в качестве средства профилактики и экстренной терапии лучевых поражений, формирующихся при радиационных авариях и катастрофах.

2. Разработанная экспериментальная модель исследования реакций количественного состава различных субпопуляций лейкоцитов, параметров клеточного иммунитета, характеристик цитокиновой сети и морфофункциональных показателей нейтрофилов, развивающихся после введения здоровым людям рекомбинантного интерлейкина-1 и последующего облучения проб их периферической крови in vitro, может быть использована для оценки эффективности радиомодифицирующих препаратов в отношении человека.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в изданиях по перечню ВАК:

  1. Аксенова Н.В. Радиопротекторная активность рекомбинантного IL-1 в отношении клеток предшественников гемопоэза / Н.В. Аксенова, А.Н. Гребенюк, С.А. Кетлинский, А.С. Симбирцев, Д.А. Сидоров, А.А. Тимошевский // Медицинская иммунология. 2003. Т. 5, № 5-6. С. 21-24.
  2. Тимошевский А.А. Реакция лейкоцитов человека на парентеральное введение интерлейкина-1 и на последующие облучение проб периферической крови in vitro / А.А. Тимошевский, А.Н. Гребенюк, Н.М. Калинина // Мед. радиология и радиационная безопасность. 2005. Т. 50, № 2. С. 5-17.
  3. Гребенюк А.Н. Противолучевые свойства интерлейкина-1 / А.Н. Гребенюк, К.Г. Саркисян, А.А. Тимошевский // Вестник Российской Военно-медицинской академии. – 2005. – № 1 (13). – С. 44-53.
  4. Гребенюк А.Н. Препараты интерлейкина-1 в лечении поражений ионизирующими излучениями / А.Н. Гребенюк, Н.В. Аксенова, В.В. Конев, К.Г. Саркисян, А.А. Тимошевский // Вестник Российской Военно-медицинской академии. – 2005. – № 1 (14). – С. 161-162.
  5. Гребенюк А.Н. Экспериментальное обоснование целесообразности использования рекомбинантного IL-1beta для коррекции эффектов
    фракционированного облучения / А.Н. Гребенюк, В.В. Конев, А.А. Тимошевский // Медицинская иммунология. 2005. Т. 7, № 5-6. С. 605-611.
  6. Гребенюк А.Н. Перспективные направления фармакологической коррекции пострадиационных нарушений иммунитета / А.Н. Гребенюк, Н.А. Смирнов, Ю.А. Севрук, А.А. Тимошевский // Военно-медицинский журнал. 2005. Т. 327, № 8. С. 49-53.
  7. Гребенюк А.Н. Перспективы совершенствования средств и методов профилактики радиационных поражений / А.Н. Гребенюк, Н.В. Аксенова, В.В. Зацепин, Д.А. Сидоров, А.А. Тимошевский // Вестник Российской Военно-медицинской академии. 2005. № 1 (15). Приложение. – С. 404-405.
  8. Гребенюк А.Н. Принципы, средства и методы медицинской противорадиационной защиты / А.Н. Гребенюк, В.В. Зацепин, А.А. Тимошевский // Медицина катастроф. 2007. № 3 (59). С. 32-37.
  9. Гребенюк А.Н. Влияние раннего терапевтического применения интерлейкина-1 на выживаемость и костномозговое кроветворение облученных мышей / А.Н. Гребенюк, В.В. Зацепин, Н.В. Аксенова, А.А. Тимошевский // Вестник Российской Военно-медицинской академии. 2008. № 1 (21). С. 135-138.
  10. Гребенюк А.Н. Влияние раннего терапевтического применения интерлейкина-1 на количество иммунокомпетентных клеток в периферической крови, тимусе, селезенке и костном мозге облученных мышей / А.Н. Гребенюк, В.В. Зацепин, А.В. Петров, Н.В. Пигарева, А.С. Симбирцев, А.А. Тимошевский // Вестник Российской Военно-медицинской академии. 2008. № 3 (23). С. 29-35.
  11. Тимошевский А.А. Медицинская противорадиационная защита специалистов аварийно-спасательных формирований / А.А. Тимошевский, Н.М. Калинина, А.Н. Гребенюк, В.В. Зацепин // Медико-биологические и социально-психологические проблемы безопасности в чрезвычайных ситуациях. – 2008. – № 4. – С. 13-18.
  12. Алексанин С.С. Клинико-экспериментальное обоснование интерлейкина-1 как средства профилактики и ранней терапии поражений при радиационных авариях и катастрофах / С.С.Алексанин, А.А. Тимошевский // Медико-биологические и социально-психологические проблемы безопасности в чрезвычайных ситуациях. – 2009. – № 2. – С. 5-11.

Статьи в журналах, сборниках трудов, тезисы докладов:

  1. Гребенюк А.Н. Реакция нейтрофилов на облучение крови в малых дозах in vitro / А.Н. Гребенюк, В.В. Конев, А.А. Тимошевский, В.Г. Конусова, Н.М. Калинина, О.С. Солнцева // 3 Съезд по радиационным исследованиям: Тез. докл. – Т. 1. Пущино, 1997. С. 22-23.
  2. Сидоров Д.А Экспериментальное изучение влияния рекомбинантного интерлейкина-1 на костномозговой и кишечный синдром при остром лучевом воздействии / Д.А. Сидоров, В.В. Конев, А.А. Тимошевский // Итоговая науч. конф. военно-научного об-ва слушателей I факультета и клин. ординаторов ВМедА: Тез. докл. СПб., 1998. С. 164.
  3. Тимошевский А.А. Прямое действие малых доз ионизирующего излучения на клетки периферической крови / А.А. Тимошевский // Итоговая науч. конф. военно-научного об-ва слушателей I факультета и клин. ординаторов ВМедА: Тез. докл. СПб., 1998. С. 173.
  4. Тимошевский А.А. Состояние нейтрофилов в облученных пробах крови здоровых людей и лиц, ранее подвергавшихся воздействию ионизирующих излучений / А.А. Тимошевский, А.Н. Гребенюк, В.В. Конев, Д.А. Сидоров // Юбилейная конф. молодых ученых и специалистов, посвященная 200-летию ВМедА: Тез. докл. СПб., 1998. С. 126.
  5. Тимошевский А.А. Реакция лейкоцитов периферической крови на действие малых доз ионизирующих излучений / А.А.Тимошевский, В.В. Конев, О.С. Солнцева, А.Н. Гребенюк // Морской мед. журн. 1998. Т. 5, № 2. С. 26-29.
  6. Солнцева О.С. Изменение количества апоптотических клеток, синтеза и продукции цитокинов в результате воздействия малых доз ионизирующего излучения / О.С. Солнцева, Н.М. Калинина, Н.В. Бычкова, А.Н. Гребенюк, А.А. Тимошевский, А.М. Никифоров // Морской мед. журн. 1998. Т. 5, № 3. С. 31-34.
  7. Куценко С.А. Использование цитохимических методов исследования нейтрофилов для оценки эффективности фармакологической коррекции радиационных поражений / С.А. Куценко, А.Н. Гребенюк, Е.В. Давыдова, Д.А.Сидоров, А.А. Тимошевский, В.В. Конев // От materia medica к современным медицинским технологиям: Матер. Всерос. науч. конф. СПб., 1998. С. 89.
  8. Гребенюк А.Н. Экспериментально-теоретическое обоснование возможности применения рекомбинантного интерлейкина-1 в качестве средства ранней коррекции гематологического синдрома радиационной этиологии / А.Н. Гребенюк, Д.А. Сидоров, А.С. Симбирцев, Н.В. Аксенова, Е.В. Давыдова, В.В. Конев, А.А. Тимошевский // Современные проблемы медицинской науки и практики: Сб. науч. статей. СПб., 1998. С. 38-39.
  9. Конев В.В. Оценка влияния рекомбинантного интерлейкина-1 на гематологические показатели при фракционированном радиационном воздействии / В.В. Конев, А.А. Тимошевский, Д.А. Сидоров // Итоговая науч. конф. военно-научного об-ва слушателей I факультета и клин. ординаторов ВМедА: Тез. докл. СПб., 1999. С. 62.
  10. Гребенюк А.Н. Исследования радиозащитной эффективности интерлейкина-1 в Военно-медицинской академии / А.Н. Гребенюк, Н.В. Аксенова, В.В. Конев, Д.А. Сидоров, А.А. Тимошевский // Адаптация организма к неблагоприятным условиям среды обитания: Сб. науч. статей. – СПб.: Изд-во “АСПОР” СПбГМПА, 1999. – С. 50-54.
  11. Калинина Н.М. Оценка радиозащитной эффективности препарата «Беталейкин» в исследованиях in vitro / Н.М. Калинина, О.С. Солнцева, Д.А. Сидоров, А.Н. Гребенюк, В.Г. Конусова, А.С. Симбирцев, А.А. Тимошевский // Фундаментальные и прикладные проблемы биотехнологии и медицины: Матер. Юбилейной науч.-техн. конф. СПб., 2000. С. 30.
  12. Гребенюк А.Н. Влияние «Беталейкина» на количественные и функционально-метаболические показатели лейкоцитов людей при облучении проб периферической крови in vitro / А.Н. Гребенюк, А.А. Тимошевский // Радиационные поражения, перспективы развития средств индивидуальной защиты от ионизирующих излучений: Тез. докл. науч.-практ. конф. М., 2000. С. 20.
  13. Аксенова Н.В. Радиопротек

    Pages:     | 1 |   ...   | 4 | 5 ||
     








 
© 2013 www.dislib.ru - «Авторефераты диссертаций - бесплатно»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.